英國OXOID藥敏紙片使用操作流程

發(fā)布時(shí)間： 2020-08-20　　點(diǎn)擊次數： 2308次

Oxoid抗微生物藥物敏感性試驗紙片操作流程

操作流程：

提供的材料：Oxoid抗微生物藥物敏感性試驗紙片。

需要但沒(méi)有提供的材料：用適當培養基制成的瓊脂平板、接種用的混懸培養基、無(wú)菌接種環(huán)和拭子、無(wú)菌鑷子、麥氏濁度標準液、培養箱、改良的氣體環(huán)境、抗生素紙片分配器、質(zhì)控菌種、測量抑菌環(huán)大小的裝置和當地標準方法的判讀標準。

方法：Oxoid藥敏紙片可能會(huì )與各種標準檢測方法一起使用，包括但不限于BSAC、CDS、DIN、CLSI M2或EUCAST，請參見(jiàn)現行的當地指南，查找特定信息，如推薦的培養基、接種物濃度水平和培養條件等。

質(zhì)控程序：建議以適當的間隔檢測質(zhì)控菌株，可以在每次做試驗時(shí)進(jìn)行，也可以根據國家標準機構提供的抗生素敏感性檢測指南推薦的程序。如果質(zhì)控微生物對特定抗生素的檢查結果在規定的范圍以外，不得報告患者的檢查結果，并不得使用該藥敏紙片，直至確定了產(chǎn)生這種不一致結果的原因（例如培養基、灌裝量、接種物、培養條件、質(zhì)控菌株或者藥敏紙片儲存或使用不正確）。

限制：本產(chǎn)品供體外診斷使用，僅用于指示供試微生物的體內敏感性。選擇何種抗微生物藥物進(jìn)行測試和報告必須由每個(gè)臨床實(shí)驗室來(lái)決定。臨床醫生負責決定使用何種抗生素對抗供試微生物，同時(shí)應考慮可能影響藥物體內活性的其它因素。

臨床實(shí)驗室標準化協(xié)會(huì )（CLSI）方法小結（其它標準有所不同）：培養基：Mueller-Hinton瓊脂用于檢測非苛養微生物。Mueller-Hinton加5%綿羊血用于檢測腦膜炎奈瑟氏菌和鏈球菌，GC瓊脂加1%規定的生長(cháng)添加劑用于檢測淋病奈瑟氏菌。嗜血桿菌檢測培養基用于檢測流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌。其它苛養菌或很少檢測的細菌所用的培養基和檢測條件可在CLSI M45中找到。平板和藥敏紙片在使用前要在室溫下平衡。平板在接種細菌前不應太潮濕。

供試微生物：采取適當的檢測方法來(lái)核實(shí)供試微生物的推測鑒定結果。采用直接菌落法或生長(cháng)法制備標準化的接種物并在制備好的15分鐘內接種到平板上：生長(cháng)法－用接種環(huán)蘸取3至5個(gè)形態(tài)上相似的菌落，并將其轉移到4-5 ml的胰蛋白胨大豆肉湯或

類(lèi)似培養基中。在35℃下培養2-6小時(shí)。用無(wú)菌鹽水或肉湯調整濁度，使濁度等于0.5 麥氏濁度標準（制備0.5 麥氏濁度標準液：將0.5 ml的0.048M 氯化鋇[1.175% 重量/體積 BaCl₂ ·2H₂O]加入99.5 ml 0.18 mol/l硫酸[1% 體積/體積]中－將這一標準液置于暗處）。直接菌落法（葡萄球菌和鏈球菌的方法）－從非選擇性瓊脂上挑取分離的菌落，加入無(wú)菌鹽水或肉湯中，并制成等于0.5 麥氏濁度標準的菌懸液。

接種：將無(wú)菌拭子浸入菌懸液中，對著(zhù)試管壁旋轉按壓，擠出多余的液體。沿著(zhù)至少三個(gè)方向涂布平板表面。應在接種的15分鐘內將藥敏紙片放到平板上。

藥敏紙片：使用前要將藥敏紙片放置于室溫下。每塊平板推薦的試驗藥敏紙片數量如下：

微生物：	每塊平板推薦的藥敏紙片：
淋病奈瑟氏菌，副流感嗜血桿菌，流感嗜血桿菌和鏈球菌	140-150 mm的平板上要9張藥敏紙片，或者90-100 mm的平板上要4張藥敏紙片
腦膜炎奈瑟氏菌	140-150 mm的平板上要5張藥敏紙片，或者90-100 mm的平板上要2張藥敏紙片
非苛養菌	140-150 mm的平板上要12張藥敏紙片，或者90-100 mm的平板上要5張藥敏紙片

在貼上藥敏紙片的15分鐘內翻轉平板，并按照下面的規定培養

微生物：	培養要求：
流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌	5% CO₂，35±2℃，16-18小時(shí)
淋病奈瑟氏菌	5% CO₂，36±1℃，20-24小時(shí)
腦膜炎奈瑟氏菌	5% CO₂，35±2℃，20-24小時(shí)
非苛養菌*	需氧，35±2℃，16-18小時(shí)
鏈球菌	5% CO₂，35±2℃，20-24小時(shí)

*葡萄球菌和腸球菌需要培養24小時(shí)。耐甲氧西林的葡萄球菌可能在溫度超過(guò)35℃的條件下檢測不出來(lái)。

判讀：培養后，測量細菌生長(cháng)*抑制區域的直徑，到mm。抑菌環(huán)的邊緣應為肉眼可以發(fā)現的無(wú)明顯微生物生長(cháng)的區域。血平板的結果利用反射光從平板的上表面讀?。ú挥米x取溶血環(huán)的邊緣，而是細菌生長(cháng)的邊緣）。所有其它培養基要使用黑色背景和反射光從平板的背面判讀（葡萄球菌和腸球菌除外，它們采用投射光讀?。形⑷醯纳L(cháng)表明有耐藥性）。如果是變形桿菌，忽略在明顯的抑菌環(huán)上生長(cháng)的一層薄薄菌膜。對結果進(jìn)行判讀的完整說(shuō)明可依照CLSI方法，請參考現行的CLSI M100標準。下表只詳細說(shuō)明了在CLSI標準中的那些藥物/濃度。與其它標準方法一起使用的其它藥物和濃度可從Oxoid獲得，但沒(méi)有在本說(shuō)明書(shū)中詳細列出。

*部分摘自CLSI文件M100-S20（M02-A10）：“藥敏紙片擴散法補充表”抗微生物藥物敏感性試驗性能標準?？蓮呐R床和實(shí)驗室標準化協(xié)會(huì )（940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19807）獲得完整的標準。

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